Nama Produk
Nama Generik: Kit Ekstraksi asam nukleat
Nama Komersial: Kit Ekstraksi Cepat DNA/RNA (Putar-Kolom)
Berkemas
DP4611(50 preps) /DP4612(100 preps) /DP4613(200 preps)
Tujuan penggunaan
Untuk isolasi dan pemurnian DNA/RNA virus berkualitas tinggi dari sel, darah,
serum, plasma, getah bening, cairan bersel, superangkouler kultur sel atau virus lainnya
menjaga cairan.
Prinsip
Kit tersebut juga menerapkan buffer pengikatan yang unik/ Protase K nuklease virus dengan cepat
dan menonaktifkan virus. Kemudian genom DNA dan RNA yang tebicit secara selektif hingga menjadi silicingpuas
membran di larutan garam tinggi. Kontaminan seperti metabolit seluler dan protein, dll.
dihapus melalui serangkaian langkah sentrifuga yang sentrifugal. Akhirnya dimurnikan
DNA dan RNA genom mengandung membran silica yang mengandung sulfat wingerrt buffer EB.
Penyimpanan dan validitas
1. Protesase K (serbuk kering) disimpan dalam -20±5; Buffer RW dapat disimpan di bawah
2 20 1 bulan, dan -± 5 C selama 1 tahun; komponen lain disimpan di bawah ini
suhu ruangan.
2. Kit ini berlaku selama satu tahun. Harap gunakan dalam masa berlakunya.
Instrumen yang berlaku
Model ini sesuai untuk Bioteh CR3180 dengan kecepatan tinggi yang ditetapkan sentrifugal yang dikulkas
dan instrumen serupa.
Persyaratan untuk Sampel
Gunakan sampel segar atau sampel yang disimpan dengan benar. Kami menyarankan eksperimen
lakukan segera setelah sampel dikumpulkan. Mohon simpan sampel di 2-8
Untuk sementara atau di -20 atau -80 untuk pengawetan jangka panjang.
Prosedur
* Tambah alkohol absolut ke dalam buffer pencucian WB seperti yang ditentukan
sebelum menggunakan!
Persiapan proteinase K:
Tambahkan 1000μL air lab pada setiap bagian proteinase K(bubuk kering) (akhirnya
Konsentrasi adalah 40mg/mL). Campur dengan terbalik sepuluh kali hingga menjadi benar-benar terlarut.
Simpanlah dengan 2 20 C untuk penggunaan jangka pendek dan -± 5 untuk penyimpanan jangka panjang. Hindari
pengulangan pembekuan-pencairan selama lebih dari lima kali.
1. Tambahkan 200μL sampel cairan(serum, plasma, darah, dll.) ke dalam tabung sentrifugal mL.
Untuk contoh awal cair kurang dari 200μL, tambahkan 1 Tambah penukar ASCII sampai ke Tambah is200μL 2 pada Tambah jumlah. Jika volume awal antara 200μL-300μL, harap tambahkan reagen
secara proporsional dalam prosedur berikutnya. Untuk sampel jaringan, silahkan giling
Pertama, gunakan 200μL buffer LB untuk espend, lalu tambahkan ke buffer virus.
2. Tambahkan 500μL dari virus akhir disimpan dalam buffer VL1. Tambahkan 20μL larutan proteinase K (40mg/mL).
Kocok selama 15 detik untuk pencampuran yang memadai. Lalu pengeram pada 65 celcius selama 15 menit. Selama
inkubasi, harap campurkan hingga ke atas hingga ke bawah selama 3-4 kali.
3. Tambahkan 300µl alkohol absolut dan kocok-kocok
secara menyeluruh.
Kekuatan dan campuran yang tepat sangat penting dalam prosedur di atas.
Pencampuran yang tidak memadai akan menghasilkan hasil asam nukleat yang rendah.
4. Transfer solusi dan lokasi presipitasi (jika ada) ke dalam kolom spin
VI (spin Column dalam tabung koleksi). Dan pada jam 10:000,000 rpm untuk 30 tahun, dan kosong
filtrasi dalam tabung kumpulan.
5. Tambahkan 700µl dari RW buffer (harap pastikan alkohol absolut telah ditambahkan sebelum digunakan)
dan sentrifuge pada 12.000 rpm selama 30 tahun. Buang filtrasi.
6. Tambahkan 500µl dari RW buffer (harap pastikan alkohol absolut telah ditambahkan sebelum digunakan)
dan sentrifuge pada 12.000 rpm selama 30 tahun. Buang filtrasi.
7. Letakkan kolom spin VI kembali ke tabung koleksi dan sentrifge pada rpm 13.000
2 mnt. Lepaskan buffer pencucian jika memungkinkan. Jika tidak, etanol akan mempengaruhi
reaksi berikutnya.
8. Transfer kolom spin VI ke tabung sentrifugal baru dan tambahkan pemanasan 50µl-30
(65 -70C waterbath ) buffer EB hingga pertengahan film adsorpsi. Tempatkan di
suhu kamar selama 2 menit. Mengsebuah kotak di 12.000rpm selama 1 mnt.Tambahkan solusi ke dalam bentuk putar
dan tempatkan pada suhu kamar selama 2 menit. Pada usia Rp.15.000.000 rpm untuk kebutuhan 1 mnt.
9. DNA dapat disimpan di 2-8, dan -20 untuk penyimpanan jangka panjang. Sebaiknya mundur
RNA yang tranpencat di dalam cDNA atau RNA toko di -80.
Kinerja
1. Kit ini dapat digunakan untuk mengekstrak asam nukleat dari darah, plasma dan serum
secara efektif
2. Hasil dari paket tersebut stabil dan memiliki daya pengulangan yang baik.
Perhatian
1. Tambahkan etanol ke dalam RW buffer sebagaimana ditetapkan sebelum digunakan (tambah 60mL etanol in
15mL RW, atau 100ml etanol dalam 25mL RW, atau 200ml etanol dalam 50mL), dan campur
semuanya sudah lengkap). Harap periksa untuk menghindari penambahan berulang!2. Untuk menghindari penurunan aktivitas dan memudahkan transportasi, protease K
disediakan sebagai bubuk kering. Setelah diterima, harap sentrifuge kemudian menambahkan 1 mL
Air yang steril yang larut (konsentrasi akhir adalah 40mg/mL). Seperti pengulangan dibekukan
dan pencairan tersebut akan mengurangi aktivitas protease. Pisahkan paket (20μL per
Paket) segera setelah solusi atau penyimpanan di bawah -20.
3. Tutup rapat-rapat saat selesai menggunakan solusi untuk menghindari volatilitas,
okitisasi dan perubahan nilai-nilai PH setelah lama paparan udara.